论著 | miR-21-5p 下调 Smad7 促进成纤维细胞活化及增殖参与损伤性气管狭窄的作用机制
论著 | miR-21-5p 下调 Smad7 促进成纤维细胞活化及增殖参与损伤性气管狭窄的作用机制
【摘 要】 目的 研究 miR-21-5p 对脂多糖诱导成纤维细胞生物学功能的影响,探讨 miR-21-5p 下调 Smad7 在损伤性气管狭窄中分子机制的作用。方法 首先以荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法,验证 miR-21-5p 在损伤性气管狭窄患者肉芽组织中的表达。在细胞实验中,采用双荧光素酶报告实验分析 miR-21-5p 对下游基因 Smad7 的靶向作用;再以 1μg/ml 脂多糖诱导培养成纤维细胞 48 h,建立损伤性气管狭窄的细胞模型,分为对照组、模拟物阴性对照(NC)组、模拟物组、抑制剂 NC 组、抑制剂组。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,RT-qPCR 和蛋白印迹法检测转化生长因子(TGF)-β1、Smad7、1 型胶原蛋白(COL1A1)mRNA 及其蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比,损伤性气管狭窄患者肉芽组织中 miR-21-5p 表达上调。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21-5p 可与 Smad7 的 3'UTR 区域直接结合,下调 Smad7 表达。细胞实验中,CCK-8 实验结果示:与对照组、模拟物 NC 组、抑制剂 NC 组对比,模拟物组成纤维细胞活力最强,抑制剂组细胞活力最弱,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组、模拟物 NC 组对比,模拟物组 TGF-β1、COL1A1 mRNA 及其蛋白上调表达,Smad7 mRNA 及其蛋白下调表达,差异均有统计学意义(P<0.01),在抑制剂组中,以上结果均不同程度的逆转。结论 miR-21-5p 可能通过下调 Smad7 促进成纤维细胞活化及增殖,参与损伤性气管狭窄的发生发展。