网络药理学 | 基于网络药理学和动物实验探讨胸痹片治疗动脉粥样硬化的作用机制
网络药理学 | 基于网络药理学和动物实验探讨胸痹片治疗动脉粥样硬化的作用机制
[摘要] 目的:基于网络药理学和动物实验探讨胸痹片治疗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:通过TCMSP和HERB2.0筛选胸痹片的活性成分和作用靶点,从GeneCards、NCBI、OMIM数据库获得AS的疾病靶点,并用Venny2.1.0平台取交集获得胸痹片治疗AS的潜在作用靶点。利用STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络,Cytoscape3.10.3软件构建“中药-活性成分-靶点-疾病”网络,筛选胸痹片治疗AS的关键活性成分和关键靶点。使用DAVID数据库对潜在作用靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。使用AutoDock验证关键活性成分与关键靶点的结合能力。采用高脂饲料喂养ApoE -/- 小鼠建立AS小鼠模型。观察小鼠主动脉窦血管壁病理变化,检测血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)浓度,以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白及其mRNA表达水平。结果:获得胸痹片对应靶点572个,AS疾病靶点6197个,交集靶点405个。胸痹片治疗AS的关键活性成分有槲皮素、7-羟基雅特因、L-牛蒡子苷元、(+)-扁柏脂素、当归酰鬼白毒素、二氢脱水鬼白树脂醇等,关键靶点为磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇-3-激酶(PIK3CA)、SOD1、蛋白激酶Bα(AKT1)、磷脂酶A2第Ⅶ组(PLA2G7)、mTOR;潜在作用靶点共富集到193条信号通路,其中PI3K/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)为主要信号通路。关键活性成分与关键靶点的分子对接结合能均<0 kcal/mol。动物实验结果显示:胸痹片能降低AS小鼠LP-PLA2、MDA水平(P<0.05),升高SOD水平(P<0.05),使PI3K、Akt、mTOR蛋白表达减少(P<0.05),同时能使小鼠主动脉窦斑块、坏死及炎性细胞浸润的范围缩小。结论:胸痹片能减轻动脉粥样硬化小鼠氧化应激损伤,降低血清中LP-PLA2、MDA水平,升高SOD水平,同时抑制PI3K、Akt、mTOR蛋白表达,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。